實驗員通過核酸擴增儀開展擴增反應(yīng)。（資料圖片）
P3實驗室是廣東省第二人民醫(yī)院“手撕病毒”的秘密武器之一，每天，有400多份新冠肺炎核酸檢測均在這里開展。病毒究竟在P3實驗室是怎樣被“揪出來”的？下面就讓經(jīng)濟日報記者帶您一同揭開該院P3實驗室的神秘面紗。
“這里是與病毒‘零距離’接觸的地方，整個實驗室完全密封，室內(nèi)處于負壓狀態(tài)，我們喜歡用‘三流’來形容它，即人流、物流、氣流的單向流動，確保在里面的污染物不會泄漏到外面而造成污染。”廣東省第二人民醫(yī)院P3實驗室主任林劍國說。
“這里”，指的就是P3實驗室。每天，廣東省第二人民醫(yī)院400多份新冠肺炎核酸檢測在這里開展。作為全國首家省級應(yīng)急醫(yī)院，廣東省第二人民醫(yī)院擁有WHO國際應(yīng)急醫(yī)療隊，有著與病毒戰(zhàn)斗的豐富經(jīng)驗。而P3實驗室，就是該院“手撕病毒”的秘密武器之一。
前世今生
P3實驗室是生物安全防護三級實驗室的簡稱，P是Protection的縮寫。整個實驗室完全密封，室內(nèi)處于負壓狀態(tài)，從而使其內(nèi)部氣體不會泄漏到外面而造成污染，也就是“氣流”的單向流動。
根據(jù)微生物及其毒素的危害程度不同，生物安全防護實驗室分為4級：一級最低，四級最高。一級實驗室適用于對健康成年人無致病作用的微生物；二級適用于對人和環(huán)境有中等潛在危害的微生物；三級適用于主要通過呼吸途徑使人傳染上嚴重甚至是致死疾病的致病微生物或其毒素；四級適用于對人體具有高度危險性，通過氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明、尚無有效疫苗或治療方法的致病微生物或其毒素。
廣東省第二人民醫(yī)院新冠病毒核酸檢測就是在P3實驗室開展的。這一P3實驗室的口號是3P，平戰(zhàn)結(jié)合（Peacetime war），警鐘長鳴（Precaution），與時俱進（Progression）。平戰(zhàn)結(jié)合：平時以科研為主，定期進行應(yīng)急演練，一旦有疫情發(fā)生，立即進入應(yīng)急工作狀態(tài)。警鐘長鳴：時刻保持清醒頭腦，密切注意全球及國內(nèi)感染性疾病研究動向，做到防患于未然。與時俱進：及時跟進國際新知識、新技術(shù)、新設(shè)備，以國際視野打造實驗室。
抽絲剝繭
核酸檢測是確診新冠肺炎的“金標(biāo)準(zhǔn)”，而檢測流程中的每一個環(huán)節(jié)都是精細活，容不得半點馬虎。在操作中，實驗員面對眼前的樣本，需要“一個一個揭開蓋子加樣和核酸提取”，這無疑是與病毒的正面交鋒。
那么，P3實驗室的實驗員是如何與病毒“過招”的？據(jù)介紹，實驗室內(nèi)的檢測流程可分為5個步驟：樣本進入“傳遞窗”——滅活處理——開蓋加樣和核心提取——擴增反應(yīng)判斷結(jié)果——高壓滅菌。
第一步是樣本進入實驗室。采集的檢測樣本在進入P3實驗室前，得先進入一個特殊的窗口——“傳遞窗”，也叫作空氣鎖。它有不能同時打開的雙重門，保證傳遞樣本時帶進去的空氣被隔離在雙重門中，使實驗室外的環(huán)境不受污染。樣本將在這里開啟它在實驗室中短暫的一生。
第二步是檢測前的滅活處理。樣本將在水浴箱經(jīng)半小時56℃高溫滅活，使病毒蛋白不再有生理活性，失去感染、致病和繁殖能力。這會讓檢測時相對安全，但病毒蛋白的基因序列并沒有受到影響。
第三步是檢測的核心環(huán)節(jié)——開蓋加樣和核酸提取。
該院檢驗醫(yī)學(xué)部副主任技師胡亮杉是進入P3負壓實驗室完成設(shè)備調(diào)試、程序設(shè)定、試劑試用等前期準(zhǔn)備工作的第一人。“在標(biāo)本處理間，實驗員拿到滅活后的樣本時，第一個動作就是振蕩，盡量讓拭子上的病毒洗脫在培養(yǎng)基溶液中，再靜置5分鐘沉淀。接下來是開蓋加樣，必須人工操作，且需要兩個人高度配合才能完成。一人擰開樣本罐蓋子，另一人拿著微量移液器在樣本罐中吸取微量溶液，放到另一個提取管里，再擰上管蓋。”她介紹，就這樣，400多份樣本要打開瓶蓋吸取轉(zhuǎn)移400多次，每一次都是實驗員與病毒面對面的“開撕”。
“在開蓋轉(zhuǎn)移過程中，病毒非常容易暴露在實驗室空氣中。”胡亮杉說，“開蓋加樣時，拿著微量移液器的手往往因為戴著雙重手套，顯得有些笨拙，可又不得不小心翼翼，再加上眼罩、面屏和生物安全柜玻璃窗的三重阻隔，所有動作都顯得緩慢，手也因為動作的緩慢不時顫抖，經(jīng)常是左手扶著右手完成加樣的。”
人工核酸提取的步驟更為復(fù)雜，考驗著實驗員的耐心與謹慎。“核酸提取可以使用儀器輔助，但由于比對需要，往往要加以人工操作，需要反復(fù)進行離心、加試劑、洗滌等10多個步驟。其中，需要打開管蓋的操作就達7次以上，完成一例人工核酸提取要50分鐘左右。”胡亮杉說。
第四步是判斷結(jié)果。提取的核酸送到核酸檢測室內(nèi)，就要上儀器了。實驗員將提取的核酸加入到擴增試劑中，通過熒光PCR儀進行RT-PCR反應(yīng)，用時約110分鐘，就可分析判斷結(jié)果為陰性或陽性了。
最后是污染物的高壓滅菌處理。實驗過程產(chǎn)生的污染物通過高壓滅菌后，按普通醫(yī)療垃圾處理。
安全保障
再來看看工作人員是如何工作的。
首先，在清潔區(qū)內(nèi)穿戴中級防護服——通過緩沖間進入實驗室內(nèi)負壓工作間，在這里處理標(biāo)本，核酸提取及檢測——完畢后進行空間、表面消毒，按順序脫下防護服，通過淋浴間更衣后，回到清潔區(qū)。這些步驟一個都不能少。
核酸檢測的宗旨是高效、有序和安全。其中，工作人員的安全是重中之重。為確保安全，該院采取了多種措施。第一，人員篩選，在下達抗疫動員令后，許多人踴躍報名，經(jīng)過重重篩選，留下來的都是身體健康、訓(xùn)練有素的年輕“老手”；第二，崗前安全培訓(xùn)，嚴格按要求穿戴防護服，熟悉操作流程；第三，嚴格執(zhí)行消毒滅菌制度，該院P3實驗室管理員閆修魁全程負責(zé)每天的消毒工作；第四，建立感控督導(dǎo)員制度，及時發(fā)現(xiàn)負壓區(qū)工作人員的不適或操作不當(dāng)之處，確保人員身心安全。
到目前為止，該院P3實驗室未出現(xiàn)過生物安全問題。
去偽存真
在P3實驗室，任何一個環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題均可能導(dǎo)致“假陰性”或“假陽性”。為保障檢測質(zhì)量，檢測結(jié)果將經(jīng)歷重重比對與復(fù)核。
據(jù)介紹，檢測質(zhì)量的保障措施在檢測前就已經(jīng)開始了。樣本采集的醫(yī)務(wù)人員必須經(jīng)過嚴格培訓(xùn)和考核才能上崗，樣本質(zhì)量與采集技術(shù)密切相關(guān)，每一幀動作流程都必須按規(guī)定進行。樣本采集完后的護送工作均需按照嚴密程序，由專人專道配送到實驗室。
在檢測過程中，實驗員謹慎對待每一次測試，不錯過任何一個可疑樣本。針對可疑樣本，將選用不同試劑復(fù)核確定，防止“假陰性”出現(xiàn)；同時，每進行一批實驗，均會隨機插入3個以上空白對照，針對陽性樣本會開展病毒基因的測序比對，以防止“假陽性”出現(xiàn)。
檢測后，實驗室將定期隨機抽取檢測后的樣本送第三方實驗室檢測，對數(shù)據(jù)對比分析，保障檢測的準(zhǔn)確性。
所向披靡
被稱為“偵察兵”的該院P3檢測團隊目前有21人，70%以上是碩士以上學(xué)歷，均經(jīng)過分子生物學(xué)培訓(xùn)，擁有PCR上崗證。
“與戰(zhàn)斗在病房里的醫(yī)護人員不同，他們藏在實驗室里，每天與病毒近距離接觸，是別人看不見的‘最前線’。”林劍國說。
據(jù)悉，該實驗室嚴格遵照“新型冠狀病毒肺炎診療方案”及生物安全要求，檢測人員需在P3實驗室負壓密閉空間內(nèi)穿著中級防護裝備，5個小時不吃不喝，并要克服因負壓差及嚴密裝備導(dǎo)致的頭暈、嘔吐等癥狀。
不僅如此，檢測人員還要克服心理上的恐懼。咽拭子樣本是從疑似患者鼻咽部采集的，可能含有較多新冠病毒。檢測人員從采樣罐里拿出樣本時，病毒在密閉環(huán)境中很容易借助空氣傳播，但他們依然無怨無悔地戰(zhàn)斗在前線，把好第一道關(guān)。（記者 鄭 楊)
